幽門黃曲霉抑菌測試——復達客戶檢測案例
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755 2022年01月13日，客服中心接到安徽某公司關于菁海抑菌菜板原料的檢測，接到反饋后，實驗室工程師第一時間與客戶進行詳細溝通，情況如下：
客戶背景
客戶是一家新材料研發公司，想要對自己家的四款菁海抑菌菜板原料的黃曲霉（B1.B2.G1.G2） 幽門螺旋桿菌 （抑菌防霉）進行檢測，通過網絡平臺找到我們，咨詢具體項目并出具專業的第三方檢測報告。
樣品名稱
菁海抑菌菜板原料 1 菁海抑菌菜板原料 2 菁海抑菌菜板原料 3 菁海抑菌菜板原料 4
客戶需求
根據客戶提供的樣品，確定樣品具體測試的條件時間和項目，然后提供相關的樣品進行測試，出具專業的第三方檢測報告。
解決方案
溝通客戶寄送樣品，實驗室接收到樣品及說明書后開始進行最終的確認測試。客戶提供的測試要求相對而言比較嚴格，收到樣品后我們立刻溝實驗室進行測試的協調，實驗中我們使用了不同菌種、不不同模擬環境進行測試。從而順利進行測試。
測試項目：根據樣品說明書確定了測試項目：有黃曲霉（B1.B2.G1.G2） 幽門螺旋桿菌抑菌防霉效果，部分測試結果如下：
測試結果
一、菌株：
黃曲霉 AS 3.3950
二、黃曲霉孢子菌懸液的制備：
1.取菌種斜面，加入3~5mL無菌純水，用無菌接種環在試驗菌種的表面輕刮。
2.將孢子提取液注入250mL的錐形瓶，瓶內裝45mL 無菌純水和50粒~70粒直徑為5mm的實心玻璃球。
3.劇烈振蕩錐形瓶，以打碎孢子塊并使孢子從菌絲體中釋放出來。
4.用裝有6m厚玻璃棉的玻璃斗，將霉菌孢子懸浮液過濾到錐形瓶中，以去除大的菌絲體碎片和瓊脂塊。
5.將過濾后的孢子懸浮液離心，棄掉上層液。
6.在剩余物中加入50mL生理鹽水重新懸浮并離心。將獲得的每種霉菌孢子以這種方法離心3次(直到上層液變清)。
7.選適宜稀釋度分別取1ml接種瓊脂平皿，計算菌液濃度。
三、試驗程序
試驗方法：《消毒技術規范》2002年版 2.1.8.7 振蕩燒瓶試驗。
試驗過程：
1.試驗樣品和陰性對照樣品組（HDPE 高密度聚乙烯樹脂）經121℃滅菌15min。
2.將 0.75g樣品放入 250ml 的錐形瓶中，分別加入 70ml PBS 和 5ml 菌懸液，使菌懸液在PBS中的濃度為 1×104cfu/ml~5×104cfu/ml。
3.將錐形瓶固定于振蕩搖床上，在作用溫度為 20℃~25℃的條件下，以 300r/min振搖 2min。取0.5ml混合液加到4.5ml PBS中，10倍稀釋至適宜濃度，分別吸取1ml，置于兩個平皿，用涼至40~45℃的孟加拉紅（虎紅）瓊脂培養基作傾注，轉動平皿，使其充分均勻，瓊脂凝固后翻轉平板，置25℃±2℃培養3~5d，做活菌計數,作為振蕩前菌落數。
4.將 0.75g 樣品放入上述含有 70 ml PBS和 5ml 菌懸液的錐形瓶中，然后將錐形瓶固定于振蕩搖床上，在作用溫度為 20℃~25℃的條件下，以 300r/min 振搖1h。用PBS作適當稀釋。分別吸取振蕩前和振蕩后樣液各 1.0ml，以瓊脂傾注法接種平皿，每個樣液接種兩個平皿，進行活菌培養計數，作為振蕩后菌落數。
5.試驗同時設陰性對照樣品組（HDPE 高密度聚乙烯樹脂）和不加樣品組（空白組）。操作程序均與試驗組相同。不加樣品組分別取 5ml 菌懸液和70ml PBS 加入 250ml 錐形瓶中，混勻，分別于振蕩前和振蕩后1h，各取適當稀釋度進行活菌培養計數。
6.試驗重復3次,按下列公式計算抑菌率：
式中：X為抑菌率，%；為樣本振蕩前平均菌落數，cfu/ml；為樣本振蕩后平均菌落數，cfu/ml。
結果
結論
在本次試驗條件下，按照《消毒技術規范》2002年版 2.1.8.7 振蕩燒瓶試驗判定：
1.本實驗中不加樣品組的菌落數在1×104cfu/mL~5×104cfu/mL之間，且樣品振蕩前后平均菌落數差值在10%以內，試驗有效。
2.試驗組抑菌率與對照樣品組抑菌率的差值＜26%，產品無抗菌作用。
一、菌株：幽門螺旋桿菌 BNCC 354364
二、試驗程序
試驗方法：《消毒技術規范》2002年版 2.1.8.7 振蕩燒瓶試驗。
試驗過程：
1.試驗樣品和陰性對照樣品組（HDPE 高密度聚乙烯樹脂）經121℃滅菌15min。
2.將 0.75g樣品放入 250ml 的錐形瓶中，分別加入 70ml PBS 和 5ml 菌懸液，使菌懸液在PBS中的濃度為 1×104cfu/ml~5×104cfu/ml。
3.將錐形瓶固定于振蕩搖床上，在作用溫度為 20℃~25℃的條件下，以 300r/min振搖 2min。取0.5ml混合液加到4.5ml PBS中，10倍稀釋至適宜濃度，分別吸取1ml，置于兩個平皿，用涼至40~45℃的哥倫比亞血瓊脂培養基作傾注，轉動平皿，使其充分均勻，瓊脂凝固后翻轉平板，置35℃±2℃ 5%CO2培養3~5d，做活菌計數,作為振蕩前菌落數。
4.將 0.75g 樣品放入上述含有 70 ml PBS和 5ml 菌懸液的錐形瓶中，然后將錐形瓶固定于振蕩搖床上，在作用溫度為 20℃~25℃的條件下，以 300r/min 振搖1h。用PBS作適當稀釋。分別吸取振蕩前和振蕩后樣液各 1.0ml，以瓊脂傾注法接種平皿，每個樣液接種兩個平皿，進行活菌培養計數，作為振蕩后菌落數。
5.試驗同時設陰性對照樣品組（HDPE 高密度聚乙烯樹脂）和不加樣品組（空白組）。操作程序均與試驗組相同。不加樣品組分別取 5ml 菌懸液和70ml PBS 加入 250ml 錐形瓶中，混勻，分別于振蕩前和振蕩后1h，各取適當稀釋度進行活菌培養計數。
6.試驗重復3次,按下列公式計算抑菌率：
式中：X為抑菌率，%；為樣本振蕩前平均菌落數，cfu/ml；為樣本振蕩后平均菌落數，cfu/ml。
結果
結論
在本次試驗條件下，按照《消毒技術規范》2002年版 2.1.8.7 振蕩燒瓶試驗判定：
1.本實驗中不加樣品組的菌落數在1×104cfu/mL~5×104cfu/mL之間，且樣品振蕩前后平均菌落數差值在10%以內，試驗有效。
2.試驗組抑菌率與對照樣品組抑菌率的差值＜26%，產品無抗菌作用。
客戶反饋
客戶收到報告后說會根據結果針對自己的產品進行改良，感謝我們在產品研發過程中給出的建設性建議，并表示產品改良后會繼續找我們合作，并為我們的服務提出的大大的好評。
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