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多糖分析檢測——復達客戶檢測案例

2021年8月15日,某大學的研究團隊 咨詢檢測多糖分析。


客戶背景


某大學的研究團隊,自己研發提取一種糖類混合物,需要研發新藥物做前期測試。


樣品名稱


糖類提取物


解決方案


一、單糖組成測定實驗


1.實驗目的


使用離子色譜儀測定單糖組成。


2.實驗原理


基于糖類分子具有電化學活性及在強堿溶液中呈離子化狀態。糖類化合物為pKa>11的弱酸,在高pH值得淋洗液中,它們會部分或全部以陰離子形式存在,根據不同糖類化合物的pKa的差異引起的離子交換作用的差異以及某些糖類與陰離子交換樹脂之間的疏水性作用的不同,實現糖類化合物的高效陰離子交換分離,然后對糖分子結構中的羥基在金電極表面發生氧化反應產生的電流實現檢測。


3.實驗材料


3.1儀器


多糖分析檢測.png


3.2試劑


多糖分析檢測.png


3.3標準品


多糖分析檢測.png


4.實驗方法


4.1試劑配制


多糖分析檢測.png


4.2標準溶液的配制和計算方法


取16種單糖標準品(巖藻糖、鼠李糖、阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、木糖、甘露糖、果糖、核糖、半乳糖醛酸、葡萄糖醛酸、氨基半乳糖鹽酸鹽、鹽酸氨基葡萄糖、N-乙酰-D氨基葡萄糖、古羅糖醛酸、甘露糖醛酸)配成標準母液溶液。


取各單糖標準溶液精密配置濃度標準品作為混標。根據絕對定量方法,測定不同單糖質量,根據單糖摩爾質量計算出摩爾比。


4.3樣品準備


精密稱量10mg樣品置于安瓿瓶中,加入3M TFA 10ml,120℃水解3h。準確吸取酸水解溶液轉移至管中氮吹吹干,加入10ml水渦旋混勻,吸取100uL加入900uL去離子水,12000rpm離心5min。取上清進IC分析。


4.4色譜方法


色譜柱:DionexCarbopacTMPA20 (3*150) ;流動相:A:H2O; B:15mMNaOHC: 15mMNaOH&100mM NaOAC;流速:0.3ml/min;進樣量:5?L;柱溫:30 ?C;檢測器:電化學檢測器。


4.5標準品序列


多糖分析檢測.png


5.實驗結果


混標:溶劑峰:2.0min為氫氧化鈉的峰,40min乙酸鈉的峰。

多糖分析檢測.png

多糖分析檢測.png



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